影片讲述了新生代蜘蛛侠迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）携手蜘蛛格温（海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 配音），穿越多元宇宙踏上更宏大的冒险征程的故事。面临每个蜘蛛侠都会失去至亲的宿命，迈尔斯誓言打破命运魔咒，找到属于自己的英雄之路。而这个决定和蜘蛛侠2099（奥斯卡·伊萨克 Oscar Is aac 配音）所领军的蜘蛛联盟产生了极大冲突，一场以一敌百的蜘蛛侠大内战即将拉响！
松本梨香 大谷育江 上田祐司 川菜翠 山田恭子 林原惠美 三木真一郎 犬山犬子 铃木富子 西村千奈美 坂口候一 小西克幸 野岛健儿 吉原夏希 伊东美弥子 白石凉子 山口隆行 白仓麻子 加藤木贤志 高桥良吉 比嘉久美子 幸月美和 川濑晶子 石冢运升 山寺宏一 牧濑里穗 铃木木瓜
田中真弓 冈村明美 中井和哉 山口胜平 平田广明 大谷育江 渡边美佐 山口由里子 大友龙三郎 草尾毅 野岛健儿 植村喜八郎 园部启一 矢尾一树 稻田彻 橘U子 高冢正也 金月真美 辉介 中友子 进藤尚美 野田顺子 竹本英史 福原耕平 田中大文 冈本宽志 森岳志 镰田梢 藤本隆弘 金子英彦 平井启二 山本圭一郎 粕谷雄太 金光祥浩 坂熊孝彦 柴崎幸一 铃木贤 高桥刚 辰浦亮 寺本勋 日置秀马 松岛广明 松原大典 松本考平 安田早希 远藤智佳 坂元奈月 安西英美 大河内雅子 大越多佳子 川名真知子 小林弥生
矢岛晶子 楢桥美纪 藤原启治 兴梠里美 真柴摩利 林玉绪 一龙斋贞友 佐藤智惠 玄田哲章 小樱悦子 爱河里花子 樱井智 堀内贤雄 龙田直树 木村雅史 仓田雅世 那须惠 筈见纯 足立友 真堂圭 村上信五 大仓忠义 大西健晴 田中一成 阪口周平 浦山迅 乃村健次 井上喜久子 川浪叶子 山野史人
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